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如何更好的對(duì)優(yōu)等胎牛血清進(jìn)行儲(chǔ)存與解凍？
發(fā)布日期：
2019-01-11
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優(yōu)等胎牛血清生產(chǎn)過(guò)程在一個(gè)可控的條件下進(jìn)行。SIP滅菌、無(wú)菌過(guò)濾和分裝作為關(guān)鍵的滅菌過(guò)程證實(shí)是有效的。產(chǎn)品生產(chǎn)符合質(zhì)量管理標(biāo)ISO9001。胎牛血清生產(chǎn)過(guò)程遵循IVDD78/79/EC。血清熱滅活通過(guò)56度水浴保持30分鐘完成。熱滅活是破壞補(bǔ)體的方法之一，確保細(xì)胞不會(huì)通過(guò)抗體連接而溶解。適用于MRC5、HEPG-2、Hela、3T3、Sf9、CHO、HYBRIDOMA、原代細(xì)胞和神經(jīng)原細(xì)胞等的生長(zhǎng)。
優(yōu)等胎牛血清解凍：將血清從冰凍區(qū)中取出后（切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍，這樣因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀），先置于2～8℃區(qū)域中使之融化，然后在室溫下使之全融。使用前再預(yù)溫到將使用的溫度（如37℃），但必須注意的是，解凍過(guò)程中應(yīng)輕輕地?fù)u晃均勻。
如何儲(chǔ)存和解凍優(yōu)等胎牛血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。
長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲(chǔ)存血清，并避免反復(fù)凍融。
我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。若一次無(wú)法用完一瓶，建議無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。
優(yōu)等胎牛血清是從適合人類(lèi)衛(wèi)生習(xí)慣的農(nóng)場(chǎng)收集的。有時(shí)，也可能用其他的牛血清，如新生牛血清或者供體牛血清。在細(xì)胞培養(yǎng)中，血清供應(yīng)了豐富的高分子蛋白，低分子量營(yíng)養(yǎng)物，疏水載體蛋白和其他體外細(xì)胞生長(zhǎng)必要的成分如激素和粘附因子。同時(shí)，血清可以增加培養(yǎng)基的緩沖能力或中和有毒成分，起到保護(hù)細(xì)胞的作用。在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中是否選擇添加血清，主要根據(jù)基礎(chǔ)培養(yǎng)基化學(xué)成分，培養(yǎng)細(xì)胞的類(lèi)型和培養(yǎng)體系而定。
熱滅活的目的是為了去除血清中的補(bǔ)體等對(duì)熱敏感的物質(zhì)，但是在優(yōu)等胎牛血清中對(duì)補(bǔ)體的滅活則明顯沒(méi)有必要。
研究人員曾對(duì)商業(yè)胎牛血清中的補(bǔ)體成分進(jìn)行測(cè)定，他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1、C6僅達(dá)成年動(dòng)物血清的1-3%，而其它補(bǔ)體成分僅有成年動(dòng)物的5-50%，至于補(bǔ)體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。通過(guò)補(bǔ)體固定實(shí)驗(yàn)，我們也在多個(gè)不同批次的胎牛血清中獲得了相似的結(jié)果。
因此，優(yōu)等胎牛血清在大部分的細(xì)胞培養(yǎng)中是不需要滅活的，但在免疫學(xué)研究中，培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。
