人源細胞系作為體外模型而被廣泛應用于生物醫(yī)學研究。正確數(shù)據(jù)的獲得常依賴于細胞系的特性,尤其是當它用來替代其來源者的組織時。 人源細胞系常規(guī)培養(yǎng)傳代流程:
?。?)吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2-3ml 0.25%胰酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在1-2min)
?。?)注意培養(yǎng)基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存
?。?)取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當?shù)?培養(yǎng)基,把細胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
?。?)鏡下觀察消化情況,在HS505.T人淋巴結(jié)成纖維樣細胞生長特性邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂?。┤サ粢让?,加6-8ml*培養(yǎng)基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
人源細胞系的培養(yǎng)注意事項:
1.傳代培養(yǎng)時要注意無菌操作并防止細胞之間的交叉污染,所有操作要盡量靠近酒精燈火焰。每次只進行一種細胞的操作。每一種細胞使用一套器材,培養(yǎng)用液應嚴格分開。
2.每天觀察細胞形態(tài),掌握好細胞是否健康的標準:健康細胞的形態(tài)飽滿,折光性好,生長致密時即可傳代。
3.如發(fā)現(xiàn)細胞有污染跡象,應立即采取措施,一般應棄置污染的細胞,如果必須挽救,可加含有抗生素的BSS或培養(yǎng)基反復清洗,隨后培養(yǎng)基中加入較大量的抗菌素,并經(jīng)常更換培養(yǎng)基等。
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