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如何培養(yǎng)羊水細胞
發(fā)布日期：
2020-12-02
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體外的羊水細胞與絨毛膜培養(yǎng)是每一個細胞遺傳學實驗室的重點工作，因為核型分析所需的中期（metaphase）染色體有賴于獲得處于分裂狀態(tài)下的細胞。羊水穿刺與絨毛膜取樣是現今主要的侵入性手段用于胎兒染色體異常的診斷。用于胚胎期診斷化驗中人類羊水細胞和絨毛膜樣品培養(yǎng)的*培養(yǎng)基，緩沖效果更佳。培養(yǎng)基冷凍包裝。
采用如下方法做羊水細胞原位培養(yǎng)或按其它常規(guī)羊水細胞培養(yǎng)方法培養(yǎng)羊水細胞：
1、取羊水20ml，以120xg離心十分鐘。
2、在無菌操作臺操作，棄上清液。
3、加入2ml羊水培養(yǎng)基，輕輕 混勻，制成細胞懸液。
4、取35mm培養(yǎng)皿，在蓋子上面及下半部側壁都做好標記。（包括編號、姓名、日期等）
5、滴加0.5ml細胞懸液至培養(yǎng)皿中的蓋玻片（25px2）中央，用移液管尖小心攤開。注意液體不能流出蓋玻片。
6、將培養(yǎng)皿置于5% CO2、濕度飽和的37度培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。
7、24小時后，給每塊蓋玻片補加1.5ml培養(yǎng)基。
8、接種7天后觀察細胞。當發(fā)現蓋玻片上細胞克隆數大于10個，每個克隆細胞數大于300且克隆邊沿細胞呈旺盛分裂狀態(tài)時，即可收獲細胞。否則，繼續(xù)培養(yǎng)1~2天。當克隆邊沿細胞融合度大于90%，呈現停止分裂狀態(tài)時，意味細胞已經老化，不適合用作分析。
9、適合收獲的細胞按常規(guī)方法使細胞分裂停止在有絲分裂中期并制作細胞片，經吉姆薩染色處理后做染色體核型分析。
17758005454
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